1. Svrha: Cilj ove procedure je osigurati standardizirani postupak za aseptične operacije i zaštitu sterilnih prostorija.
2. Područje primjene: laboratorija za biološka ispitivanja
3. Odgovorna osoba: Nadzornik kontrole kvaliteta, tester
4. Definicija: Nema
5. Sigurnosne mjere
Strogo provodite aseptične operacije kako biste spriječili mikrobnu kontaminaciju; operateri trebaju isključiti UV lampu prije ulaska u sterilnu prostoriju.
6. Procedure
6.1. Sterilna prostorija treba biti opremljena sterilnom operacionom salom i tampon prostorijom. Čistoća sterilne operacione sale treba da dostigne klasu 10000. Unutrašnja temperatura treba da se održava na 20-24°C, a vlažnost vazduha na 45-60%. Čistoća čistog radnog stola treba da dostigne klasu 100.
6.2. Sterilna prostorija treba da se održava čistom, a strogo je zabranjeno gomilanje otpada kako bi se spriječila kontaminacija.
6.3. Strogo spriječiti kontaminaciju sve opreme za sterilizaciju i medija za kulturu. Oni koji su kontaminirani trebaju prestati s njihovom upotrebom.
6.4. Sterilna prostorija treba biti opremljena dezinfekcijskim sredstvima radne koncentracije, kao što su 5% rastvor krezola, 70% alkohola, 0,1% rastvor hlormetionina itd.
6.5. Sterilnu prostoriju treba redovno sterilizirati i čistiti odgovarajućim dezinfekcijskim sredstvom kako bi se osiguralo da čistoća sterilne prostorije ispunjava zahtjeve.
6.6. Svi instrumenti, posuđe i ostali predmeti koji se moraju unijeti u sterilnu prostoriju trebaju biti čvrsto umotani i sterilizirani odgovarajućim metodama.
6.7. Prije ulaska u sterilnu sobu, osoblje mora oprati ruke sapunom ili dezinfekcijskim sredstvom, a zatim se presvući u posebnu radnu odjeću, obuću, kape, maske i rukavice u sobi sa zaštitnim slojem (ili ponovo obrisati ruke 70%-tnim etanolom) prije ulaska u sterilnu sobu. Radnje se moraju obavljati u bakteriološkoj komori.
6.8. Prije korištenja sterilne prostorije, ultraljubičasta lampa u sterilnoj prostoriji mora biti uključena za zračenje i sterilizaciju duže od 30 minuta, a čista klupa mora biti uključena za istovremeno propuhivanje zraka. Nakon završetka operacije, sterilnu prostoriju treba blagovremeno očistiti, a zatim sterilizirati ultraljubičastom svjetlošću 20 minuta.
6.9. Prije pregleda, vanjsko pakovanje uzorka za testiranje treba ostati neoštećeno i ne smije se otvarati kako bi se spriječila kontaminacija. Prije pregleda, dezinficirajte vanjsku površinu vatom sa 70% alkohola.
6.10. Tokom svake operacije, treba uraditi negativnu kontrolu kako bi se provjerila pouzdanost aseptičnog rada.
6.11. Prilikom upijanja bakterijske tekućine, morate koristiti vakuumsku kuglicu. Ne dodirujte slamku direktno ustima.
6.12. Igla za inokulaciju mora se sterilizirati plamenom prije i poslije svake upotrebe. Nakon hlađenja, kultura se može inokulirati.
6.13. Slamke, epruvete, petrijeve zdjelice i ostali pribor koji sadrži bakterijsku tekućinu treba potopiti u sterilizacijsku kantu koja sadrži 5% otopinu Lysola radi dezinfekcije, a zatim izvaditi i isprati nakon 24 sata.
6.14. Ako se bakterijska tekućina prolije po stolu ili podu, odmah pre tretiranja kontaminiranog područja treba sipati 5%-tni rastvor karbolne kiseline ili 3%-tni Lysol i ostaviti da djeluje najmanje 30 minuta. Kada su radna odjeća i kape kontaminirani bakterijskom tekućinom, treba ih odmah skinuti i oprati nakon sterilizacije parom pod visokim pritiskom.
6.15. Svi predmeti koji sadrže žive bakterije moraju se dezinficirati prije ispiranja pod mlazom vode. Strogo je zabranjeno zagađivanje kanalizacije.
6.16. Broj kolonija u sterilnoj prostoriji treba provjeravati mjesečno. S otvorenom čistom radnom površinom, uzmite nekoliko sterilnih Petrijevih zdjelica unutarnjeg promjera 90 mm i aseptično ubrizgajte oko 15 ml hranjivog agara koji je otopljen i ohlađen na oko 45°C. Nakon skrućivanja, postavite ga naopako na 30 do 35 °C. Inkubirajte 48 sati u inkubatoru na temperaturi od 30 do 35 °C. Nakon dokazivanja sterilnosti, uzmite 3 do 5 ploča i postavite ih lijevo, u sredinu i desno od radnog položaja. Nakon otvaranja poklopca i izlaganja 30 minuta, stavite ih naopako u inkubator na temperaturi od 30 do 35 °C na 48 sati i izvadite ih. Prosječan broj raznih bakterija na ploči u čistom području klase 100 ne smije prelaziti 1 koloniju, a prosječan broj u čistoj prostoriji klase 10000 ne smije prelaziti 3 kolonije. Ako se prekorači ograničenje, sterilnu prostoriju treba temeljito dezinficirati dok ponovljeni pregledi ne ispune zahtjeve.
7. Pogledajte poglavlje (Metoda inspekcije sterilnosti) u "Metodama inspekcije higijene lijekova" i "Standardnim operativnim praksama Kine za inspekciju lijekova".
8. Odjel za distribuciju: Odjel za upravljanje kvalitetom
Tehničke smjernice za čiste sobe:
Nakon što se postigne sterilno okruženje i sterilni materijali, moramo održavati sterilno stanje kako bismo mogli proučavati određeni poznati mikroorganizam ili koristiti njegove funkcije. U suprotnom, razni mikroorganizmi izvana se lako mogu pomiješati. Fenomen miješanja nebitnih mikroorganizama izvana naziva se kontaminirajućim bakterijama u mikrobiologiji. Sprečavanje kontaminacije je kritična tehnika u mikrobiološkom radu. Potpuna sterilizacija s jedne strane i sprječavanje kontaminacije s druge strane su dva aspekta aseptične tehnike. Osim toga, moramo spriječiti da mikroorganizmi koji se proučavaju, posebno patogeni mikroorganizmi ili genetski modificirani mikroorganizmi koji ne postoje u prirodi, pobjegnu iz naših eksperimentalnih posuda u vanjsko okruženje. U te svrhe, u mikrobiologiji postoji mnogo mjera.
Sterilna soba je obično mala prostorija posebno uređena u mikrobiološkoj laboratoriji. Može se izgraditi od folija i stakla. Površina ne bi trebala biti prevelika, oko 4-5 kvadratnih metara, a visina bi trebala biti oko 2,5 metra. Izvan sterilne sobe treba postaviti tampon prostoriju. Vrata tampon prostorije i vrata sterilne sobe ne bi smjela biti okrenuta u istom smjeru kako bi se spriječilo unošenje raznih bakterija protokom zraka. I sterilna soba i tampon prostorija moraju biti hermetički zatvorene. Oprema za unutrašnju ventilaciju mora imati uređaje za filtriranje zraka. Pod i zidovi sterilne sobe moraju biti glatki, otporni na zadržavanje prljavštine i laki za čišćenje. Radna površina treba biti ravna. I sterilna soba i tampon prostorija opremljene su ultraljubičastim svjetlima. Ultraljubičasta svjetla u sterilnoj sobi nalaze se na udaljenosti od 1 metra od radne površine. Osoblje koje ulazi u sterilnu sobu treba nositi steriliziranu odjeću i kape.
Trenutno, sterilne prostorije uglavnom postoje u mikrobiološkim fabrikama, dok se u općim laboratorijama koriste čiste klupe. Glavna funkcija čiste klupe je korištenje laminarnog uređaja za protok zraka za uklanjanje raznih sitnih čestica prašine, uključujući mikroorganizme, s radne površine. Električni uređaj omogućava zraku da prolazi kroz HEPA filter, a zatim ulazi u radnu površinu, tako da je radna površina uvijek pod kontrolom protoka sterilnog zraka. Štaviše, postoji brza zračna zavjesa na strani blizu vanjske strane kako bi se spriječio ulazak vanjskog bakterijskog zraka.
Na mjestima sa teškim uslovima, umjesto čiste klupe mogu se koristiti i drvene sterilne kutije. Sterilna kutija ima jednostavnu strukturu i lako se pomiče. Na prednjoj strani kutije nalaze se dva otvora koja su blokirana vratima na povlačenje kada nije u upotrebi. Tokom rada možete ispružiti ruke unutra. Gornji dio prednje strane je opremljen staklom radi lakšeg unutrašnjeg rukovanja. Unutar kutije se nalazi ultraljubičasta lampa, a pribor i bakterije se mogu ubaciti kroz mala vrata sa strane.
Aseptične operativne tehnike trenutno ne samo da igraju ključnu ulogu u mikrobiološkim istraživanjima i primjenama, već se i široko koriste u mnogim biotehnologijama. Na primjer, transgenična tehnologija, tehnologija monoklonskih antitijela itd.
Vrijeme objave: 06.03.2024.